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13大移液器操作技巧

  

前言:移液结果会很容易受到使用技法的影响。为了获得最佳结果,需要采用良好的移液技法。本系列教育电子快讯将向您介绍关于获得最佳性能的技巧和窍门。

技巧 1:一致性
在按压与释放定位销时,需要保持一致的节奏、速度和技法。
吸液速度过快会导致套柄与活塞喷溅、产生气雾以及受到污染,甚至导致样品量损耗。
一致性可使准确度提高达 5%。

技巧 2:正确填充吸头
当某一吸头的建议(标称)范围为最大吸头容量(标称容量)的 10% 至 100% 时,可在 35% 至 100% 这一较小以及优化的范围内实现最高精确度。
在如此小的范围内移液会减少对操作人员技法的要求,并可将结果准确度提高约 1%。
当达到标称容量的 50% 时可提供最佳结果。

技巧 3:吸液时保持垂直入水角
使入水角尽可能地接近垂直位置 – 否则垂直液柱较小,这样将会吸入过多样品。
(分液时,吸头应当与容器壁保持较小角度,从而确保良好的排液效果。关于分液的更多技巧将在下一期电子快讯中提供)
使用垂直位置(尤其是使用微量移液器时),可使准确度提高达 2%。

技巧 4:一致性千分尺设置
始终从同一方向设置您的千分尺。
最好从高至低进行:
在将容量设置从高容量减少降至低容量时,只需将表盘下调至所需容量设置。
提高容量设置时,转动选择轮使其略微超过所需容量,然后缓慢回调至正确设置。这可避免机械回冲。
正确设置容量可使准确度提高达 0.5%。

技巧 5:吸头入水深度
正确的吸头入水深度对于微量移液器尤为重要。如果吸头入水过深,则随着压力的加大,吸液量将会增多。保留在吸头表面的液体会影响结果。如果吸头未入水过深,则会造成空气进入,从而产生气泡以及导致容量不准确。正确的入水深度可使准确度提高达 5%。

 移液器容量  入水深度
 2 与 10ul  1mm
 20 与 100ul  2-3mm
 200 与 1000ul  3-6mm
 5000ul 与 10ML  6-10mm

技巧 6:分液技法
对于大多数应用而言,建议在分液时将吸头的末端贴靠容器壁。这可减少或者消除分液后残留在吸头上的样品。沿侧壁向上滑动吸头末端将移液器拆下,从而去除吸头孔处的任何残留液滴。此技法可使结果准确度提高达 1%。

另一种技法是直接分液到液体表面。使用诸如 RAININ FinePoint 吸头之类的薄壁吸头十分重要,这是因为这些吸头允许充分排液。

如果直接分液至液体中,则建议进行反向模式移液,从而防止分液后吸液。

技巧 7:预清洗
移液前至少预清洗两遍,从而补偿位于吸头内部的液体。这还有助于中和毛细管效果以及使移液器内部的空气温度等于样品温度。
使用正在分液的相同液体进行预清洗。
使用吸头吸液,然后将其重新分液至储罐或者废液箱
预清洗可为所有等分溶液提供相同的接触表面
当与水液一同使用时,两次预先冲洗可使准确度提高达 0.2%

技巧 8:预清洗异常处理
尽管预清洗在大多数情况下可提高准确性,但是当对非常温和或者冰冷的溶液进行移液时,它会对结果产生不利影响。

不建议进行预清洗的例外情况为:
- 对非常冰冷的溶液(如:冰浴)进行移液
- 对 37°C 或以上的温和溶液进行移液

对温和或者冰冷溶液进行预清洗有可能造成高达 5% 的错误率。

技巧 9:恒定室温
在恒定室温条件下移液。移液的理想室温为 +- 21.5°C,此温度同样适用于校准。防止温度大幅度或者突然变化,这是因为移液器中的空气无法足够快速地适应,以及样品量可能会受到影响。在恒温条件下移液可使准确度提高达 5%。

技巧 10:始终垂直存放移液器
不要将移液器平放在抽屉内或者工作台上。这有可能损坏套柄末端,从而造成泄漏。此外,残留液体还会流入套柄中,从而污染移液器。正确储存移液器可防止不可估量的错误以及保护仪器。

技巧 11:吸头入水时间
在将样品吸入吸头时,在样品中的入水时间是良好移液技法中的关键因素。在平稳松开定位销按钮之后,必须进行短暂暂停,然后再从样品中取出,以确保将全量样品吸入吸头中。如果量较大以及对于粘性物质而言,必须在等候较长时间后再取出,因为移液器中的气室需要一秒钟的时间才能实现均衡。

技巧 12:吸液速率
移液器的吸液速率不尽相同,因此会对结果的精度与准确度产生影响。用户应使用以一种平稳并且受控的方式释放移液器定位销按钮。释放过快的定位销可能出现的最常见后果是:气雾会进入移液器套柄中,从而损坏移液器的内部部件。当出现向上喷溅液体的情况时,这种现象更为明显。如果液体具有腐蚀性,则有可能损坏移液器的套柄并且会造成样品交叉污染。

技巧 13:反向移液模式
对于科研人员而言,使用移液器对粘性与密致液体进行精准吸液与分液一直是一道难题。对策是使用反向移液模式。进行样品吸液时,将定位销下按至“排液”。将所选液量和多余液体吸入吸液器吸头中。然后在分液时,将定位销只按至零位。通过此方法,在分液时液体会保持在吸头内。对于生物、粘性或起泡液体而言,反向移液可改进结果。

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